关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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Frdbio®藻红蛋白抗体标记试剂盒


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产品品牌:Frdbio 产品货号:ARL0022K-2
保存温度:2-8℃ 有效日期:12个月
英文名称:Frdbio®R-phycoerythrin antibody labeling Kit
规      格: 500ug
价      格:优惠价 ¥3180
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产品介绍:

藻红蛋白(R-phycoerythrin ,R-PE)是从红藻中分离提纯的一种荧光蛋白,最大激发波长为565nm,最大荧光发射峰为575nm。,由于其吸光度和荧光量产率很高,荧光强而稳定,灵敏度高备受免疫检测标记领域青睐。R-PE蛋白的亚基组成为(αβ)6γ,每个α、β亚基分子量为20KDa,每个γ亚基分子量为30KDa,总分子量为240kDa。目前还没有办法通过重组蛋白表达量产,只能从红藻中提取,因此其生产成本制约其广泛使用。



基本原理:

本试剂盒利用抗体和R-PE上游离的氨基,采用定向对接偶联技术将抗体分子与R-PE共价偶联,本试剂盒采用加长臂方案,使被标记抗体与荧光蛋白之间有一定长度柔性连接臂,避免由于位阻妨碍抗体活性或者荧光蛋白发光效率。

主要特点:

ü  试剂盒组分齐全,操作简单,只要按照操作步骤进行便可得到高品质R-PE偶联抗体;

ü  本试剂盒所配置的R-PE为高纯度,高活性荧光蛋白,荧光发光效率更高;

ü  本试剂采用定向偶联技术,荧光蛋白和抗体都不会发生自连,保证偶联物的特异性和均一性;

ü  试剂盒所使用的交联剂增加了延长臂,确保不会因为蛋白质位阻而影响发光效率;

ü  鉴于R-PE的蛋白骨架特性,其抗淬灭能力更强。

                                             

 

试剂盒已经提供材料:

ü  R-PE蛋白冻干粉      1mg*1支  可用于标记300-500ug抗体

ü  R-PE蛋白活化试剂    2mg*1支  使用前加ddH2O 200ul

ü  修饰反应液        30ml*1瓶

ü  标记缓冲液        30ml*1瓶

ü  抗体修饰试剂干粉    2mg*1支 使用前加1000ul ddH2O

ü  30KMWCO超滤管      3支

ü  封闭试剂         1支 使用前加DMSO 5ul

ü  DMSO溶剂         200ul*1支

ü  说明书          1份

其他需要自备试剂材料:

²  待标记的生物分子;

²  移液器及吸头;

²  去离子水。

试剂盒储存

试剂盒抗体修饰试剂、R-PE蛋白活化试剂封闭试剂,放在-20˚C,其余组分放在2-8可保存6个月以上。

试剂盒操作流程:

1a.抗体的修饰 与1b.R-PE的活化两个步骤同时进行

1a.抗体的修饰

1抗体修饰试剂干粉溶解于ddH2O配制成2mg/ml的抗体修饰试剂液

2)取待标记抗体(纯度>90%),用修饰反应液调整浓度到 5mg/ml左右,按照每mg抗体加入5μl抗体修饰试剂液,轻轻混匀,在室温下搅拌反应 60-90分钟。

3)反应完成后,转移到超滤管内芯,并添加标记缓冲液,通过超滤管多次离心置换溶液去除多余抗体修饰试剂,超滤管内芯收集液为修饰抗体,并调节浓度至 3mg/ml。

 

1b.R-PE蛋白的活化

1)取1支R-PE蛋白冻干粉标记缓冲液重悬到5mg/ml浓度R-PE蛋白溶液

2)R-PE蛋白活化试剂溶解于ddH2O,配制成5mg/ml R-PE蛋白活化试剂溶液,按照每mg R-PE蛋白加入100ul的比例加入到R-PE蛋白溶液,室温避光反应2小时;

3)反应完毕,转移到超滤管内芯,通过超滤管离心4次,每次120,00rpm 5min,置换为标记缓冲液,以去除游离的R-PE蛋白活化试剂,滤芯内溶液即为活化R-PE蛋白

 

2.活化R-PE蛋白与抗体偶联

1活化R-PE蛋白浓度调整为5mg/ml

2)将修饰抗体活化R-PE蛋白,按照质量比1:3比例(每mg修饰抗体对应3mg活化R-PE蛋白)混合,室温避光反应2小时;

3)将封闭试剂管中加入5ul DMSO配成封闭试剂液,按照每0.5mg抗体5ul的体积封闭试剂液加入步骤2)反应产物中,封闭未反应完的活性基团;

4)将步骤3)溶液加入超滤管通过反复离心置换标记缓冲液,去除封闭试剂等;

5)标记好的抗体分装,加入适当保护剂,-20保存备用。



注意事项:

1)本试剂盒中抗体修饰试剂、R-PE蛋白活化试剂封闭试剂为高活性试剂,请-20保存;其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2)试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒,会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3)本试剂盒中R-PE蛋白需要避光低温保存,标记过程尽量保证其避光;

4)封闭剂需现用现配,干粉溶解后不能长期保存;

5)使用本试剂盒标记抗体,其抗体特异性要高,纯度不低于90%,最好使用单克隆抗体,溶液环境不含游离氨基,最好为PBS溶液;标记前抗体需去除NaN3和BSA,抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失,因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量;

6)由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化,因此修饰后抗体需尽快与活化的R-PE进行偶联;

7)本试剂盒中的超滤管为特殊处理的,可有效避免荧光淬灭和蛋白吸附损失,市面超滤管可能会对标记效率造成影响。

8) 本试剂盒中部分试剂为高活性试剂,对皮肤和身体有一定的危害,请全程戴手套操作;DMSO属微毒类,对人体皮肤有渗透性,对眼有刺激作用,使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。



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