关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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ELISA试剂盒开发


服务简介:

ELISA实验事免疫检测最常用也最为经典的实验检测手段,ELISA主要类型有间接ELISA,双抗体夹心ELISA,竞争ELISA等;每种检测方法类型都是根据被检目标物质性质和待检标本特点以及检测限度等要求确定;福因德科技可以根据客户需求量身定做ELISA试剂盒,解决市面产品空缺或者价格昂贵等问题,有效控制您的检测成本。

服务流程:

1.项目沟通了解需求:

根据检测目标及特殊要求,确定ELISA开发类型及方案,预估费用及周期。

ELISA试剂盒主要类型包括:双夹心法、竞争法(测定抗原)、间接法(测定抗体)或竞争法(测定小分子化合物)等。

2.抗原制备:

免疫原为蛋白的参照福因德重组蛋白技术服务内容和福因德技术标准SOP进行;

小分子化合物类抗原,客户提供抗原或者提供制备方案,通过抗原中间物合成通过结构分析进行分子修饰并偶联载体蛋白,作为完全抗原;需要福因德设计合成抗原的请垂询沟通;

3.制备抗体:

根据项目需求,确定抗体制备类型和方案;一般情况下,双夹心ELISA需要配对抗体,需要筛选到单抗抗体对或者一个单抗一个多抗进行配对,通常单抗作为捕捉抗体,多抗作为检测抗体。小分子检测对于抗体的灵敏度要求很高,需要筛选到高品质单抗,并对相关类似进行交叉反应率测试;试剂盒开发不同于普通的科研实验,因此其抗体制备尽可能制备出更多的单克隆抗体细胞株,多克隆抗体也同时制备;具体制备方案,参看“抗体定制”服务介绍及福因德抗体制备标准

4.抗原或抗体标记:

根据实验需求标记抗体或者抗原,标记物一般为HRP或者生物素,也有个别需求标记碱性磷酸酶(AP.

5.抗体/抗原配对或者配合测试:

将所有的抗体或抗原进行正交反应测试,选择最优组合进一步进行浓度优化测试(浓度梯度方阵滴定)。
6.试剂盒制作条件测试及优化:

包被浓度,包被缓冲液,包被时间;封闭条件等测试;

样品反应条件测试;反应时间,反应温度,洗涤时间,洗涤次数等;

底物显色读数以及数据处理等测试。

7.ELISA试剂盒性能测试:

1)回收率测试

通过阴性样品中标准品测试计算回收率;回收率不低于85%;

2)批间差及批内差:

重复多次检测不同批次,及批次不同样本,计算批次内批次间差异;批间差批内差<8%为宜。

3)最低检测限度的确定

取多个阴性标本进行测试,其平均OD值加上3倍的标准差虽对应的标准品浓度值,定义为最低检测限度。

8.真实样本实际检测:
对标准阴性或者阳性标本(或者其他权威检测方法检测确知浓度的标本)进行检测,计算其阴阳性符合率。总符合率需要>85%

9.ELISA试剂盒组装及交付:

一般提供2-5个标准ELISA试剂盒(包括所有组分及说明书)供测试,如果需要更多,费用另算。

 



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