关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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RIPA裂解液(中)


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产品品牌:Frdbio 产品货号:RIPA裂解液(中)
保存温度: 有效日期:0个月
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RIPA裂解液(中)

1包装清单:

产品编号

产品名称

规格

WBR0102

RIPA裂解液(中)

100 ml

说明书

1

2保存条件:本产品4℃保存,一年有效。

3产品简介:

我们生产的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的WesternIP等。RIPA裂解液()的主要成分为50 mM Tris (pH 7.4)150 mM NaCl1% NP-401% sodium deoxycholate0.1% SDS,以及sodium orthovanadatesodium fluorideEDTAleupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(WB0123/WB0124/ WB0125/ WB0126)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4 使用方法:

A.对于培养细胞样品:

取适当量的RIPA裂解液混匀,在使用前加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM

B.对于贴壁细胞

去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10 min。充分裂解后,10000-14000g离心10 min,取上清,即可进行后续操作。

--裂解液用量说明: 用于不同规格标准培养板裂解液容量

板规格/表面积

试剂容量

100 mm

500-1000 μl

60 mm

250-500 μl

6-well   plate

200-400 μl   per well

24-well   plate

100-200 μl   per well

96-well   plate

50-100 μl   per well

C.对于悬浮细胞:

离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10 min以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g离心10 min,取上清,即可进行后续操作。

D.对于组织样品:

1)  手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。

2)  取适当量的RIPA裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM

3)  按组织净重(g):裂解液(ml)=110的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品, 可以适当减少裂解液的用量)

4)  用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5)  充分裂解后,10000-14000 g离心3- 5 min,取上清,即可进行后续作。

5 注意事项:

1)  抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。建议将样品分装成合适的量,然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存,不要反复冻融。

2)  需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mMPMSF(WBR0114)可以向我公司订购。

3)  RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;否则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。

4)  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

*本试剂仅供实验室研究使用


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