关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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Frdbio®第三代抗体生物素标记试剂盒


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产品品牌:Frdbio 产品货号:ARL0020SK3
保存温度:-20 有效日期:12个月
英文名称:Frdbio®The 3rd Generation Antibody Biotin Labeling Kit
规      格: 1.0mg 2.0mg 5.0mg
价      格:优惠价 ¥1500
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产品介绍:

本试剂盒先将抗体固定在磁珠固相载体上,再进行生物素标记。本试剂盒操作不需要离心等步骤,操作更简便,标记效率更高,即使抗体含有BSA、叠氮钠、甘油等都不影响生物素标记效率,标记后实验背景更低,抗体损失更少。

本试剂盒亮点:

可以直接标记抗血清,腹水,细胞培养上清中的抗体,不需要事先纯化。

基本原理:

本试剂盒先将抗体固定在预处理超顺磁性聚合物微球表面,使抗体与其他蛋白分离,再将高活性的生物素标记在抗体上,通过洗脱、中和即可得到高纯度的生物素标记的抗体可从血清、腹水等样品中分离出纯度大于90%的抗体并将其标记。

主要特点:

ü  试剂盒组分齐全,操作简单,只要按照操作步骤进行便可得到高品质Biotin-antibody偶联抗体;

ü  本试剂盒所配置的磁珠与抗体结合能力高,蛋白非特异吸附率低;

ü  本试剂采用的生物素为本公司自主设计优化合成的,增加了延长臂,标记效率更高,保证偶联物的特异性和均一性;解决了目前市面上所使用生物素标记后背景高,易脱落,抗体容易沉淀聚集或者抗体效价下降等情况。

ü  相较于传统生物素标记,本试剂盒操作时间短,不需要离心机等仪器。

 

 

试剂盒已经提供材料:

规格1mg2mg5mg
抗体固定磁珠100ul200ul500ul
活性生物素(干粉)1支1支1支
助溶剂220ul440ul1000ul
标记缓冲液15ml30ml30ml
抗体洗脱液15ml30ml30ml
抗体稳定液15ml30ml30ml
抗体保存液2ml2ml*210ml
磁力架1支1支1支
磁珠保存液2ml4ml10ml


其他需要自备试剂材料:

²  待标记的抗体;

²  移液器及吸头;

²  PBS(pH 7.2)

²  去离子水。

²  旋转离心管摇床(非必须)

试剂盒储存

试剂盒活性生物素(干粉)放在-20˚C磁力架室温存放,其余组分放在2-8可保存6个月以上。


 


试剂盒操作流程(按1mg抗体标记量):

实验前,将试剂盒各组分平衡到室温;

1.抗体的固定分离

1)取出抗体固定磁珠,吸头(用剪刀剪去吸头尖部,使吸口变大)吹打成悬浊液,立即取出适量磁珠悬浊液(此时磁珠为50%悬浊液,按照100ul悬浊液对应1mg抗体),加到1.5ml离心管中,将离心管放入磁力架上,待磁珠被全部吸附到离心管侧壁,将移液器吸头插入到离心管底部吸干磁珠保护液;

2)将离心管移出磁力架,加入1ml PBS缓冲液,吹打成悬浊液,重新放入磁力架静置,待磁珠被全部吸附到离心管侧壁,将移液器吸头插入到离心管底部吸干PBS;

3)重复上步骤2-3次;

4)将磁珠离心管移出磁力架,待标记抗体(抗血清,腹水或者细胞上清)用PBS调整为约2mg/ml浓度,加入磁珠离心管中,盖紧管盖,放在离心管旋转摇床上摇晃30分钟;

5)将离心管重新放回磁力架,待磁珠被全部吸附到离心管侧壁,将移液器吸头插入到离心管底部吸干液体;

6)重复步骤2 三次;

 

2. 生物素标记抗体

1)将离心管移出磁力架,加入适量抗体标记缓冲液(1mg抗体加入200ul标记缓冲液),同时取出活性生物素(干粉),用助溶剂调整成10mM浓度,按照1mg抗体取13.5ul生物素加入上述离心管。

2)将离心管固定在离心管旋转摇床上室温反应1个小时或者4℃反应过夜;

3)将离心管重新放回磁力架,待磁珠被全部吸附到离心管侧壁,将移液器吸头插入到离心管底部吸干液体;

4)将离心管移出磁力架,加入1ml PBS缓冲液,吹打成悬浊液,重新放入磁力架静置,待磁珠被全部吸附到离心管侧壁,将移液器吸头插入到离心管底部吸干PBS;

5)重新以上步骤2-3次;

6)将离心管移出磁力架,按照1mg抗体对应400ul抗体洗脱液,吹打磁珠10次,将离心管重新放回磁力架,待磁珠全部被吸附到离心管侧壁,将移液器吸头插入到离心管底部吸取全部的洗脱标记抗体,转移到新的离心管,立即加入100ul抗体稳定液,即得到生物素标记的抗体。


3. 生物素标记抗体的保存

加入等体积抗体保存液,-20℃保存。

4. 生物素标记抗体的标记效率计算

请参考Frdbio® HABA法生物素标记效率检测试剂盒(货号:ARL0021T1)

5. 生物素标记抗体的使用

一般来说生物素标记的抗体不能直接使用,需要配合链霉亲和素标记复合物使用,比如:FITC链霉亲和素(FITC- conjugated Streptavidin)HRP链霉亲和素(HRP- conjugated Streptavidin)


注意事项:

1) 本试剂盒只针对抗体(非IgA,IgM亚型)的生物素标记。若标记其他非抗体蛋白试剂,可选择货号ARL0020K的生物素标记试剂盒。

2) 本试剂盒中活性生物素为高活性试剂,请-20保存;其余成份2-8℃保存、勿冻存。

3)本试剂盒中组分抗体洗脱液若有沉淀析出,为正常现象,离心取上清即可。

4)试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒,会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

5)活性生物素需现用现配,干粉溶解后不能长期保存;

6)抗体洗脱后,需尽快加入抗体稳定液;

7)本试剂盒中的磁力架中磁铁为特殊材质,避免长时间放在磁铁和铁磁性材质附近,避免磁力消失。

8)  本试剂盒中部分试剂为高活性试剂,对皮肤和身体有一定的危害,请全程戴手套操作;

下载:Frdbio®第三代抗体生物素标记试剂盒

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