027-87877773
生物素连接酶(BirA)
包装清单
产品内容 | 产品编号 | 包装规格 |
生物素连接酶 | FrdE00020-1 | 100ug(1mg/ml) |
10X Buffer A | FrdE00020-2 | 1ml |
10X Buffer B | FrdE00020-3 | 1ml |
D-Biotin | FrdE00020-4 | 1ml（500uM） |
-20℃保存，蓝冰运输
来源：E.coli
1、产品简介
生物素连接酶(Biotin Ligase,BirA)是大肠杆菌BirA基因编码的双功能蛋白质,能识别蛋白质分子的特异性序列(BirA Substrate Peptide),使蛋白质生物素化。该酶带有6his标签，剪切反应完毕后可通过Ni-NTA去除。
表1.生物素连接酶产品性能。
生物素连接酶 | 性能 | ||
浓度 | 1mg/ml | ||
酶活 | ＞7.5kU/mg | ||
最适合酶活pH | 8.0-9.0(可操作范围6.0-9.0） | ||
最适酶活温 | 37°C （温度范围0-37°C） | ||
辅助因子 | 5-10mM Mg 2+ | ||
储存缓冲液 | 20mM Tris, 20mM NaC|， 2mM,Mgcl2,10%Glycerol,pH8.0， | ||
储存温度 | ﹣20℃，避免反复冻融 | ||
2、酶活定义
37°C，pH 8.0反应条件下，将1pmol蛋白质或者多肽（融合BSP序列）生物素化所需要的
的酶量定义为一个活性单位(U)。
3、产品应用
生物素标记融合BSP的蛋白质
4、反应体系
反应物组成 | 体积 | 终浓度 |
生物素连接酶 | 0.17ul | 6.4ng/ul |
10X Buffer A | 2.5ul | 1X |
10X Buffer B | 2.5ul | 1X |
蛋白（多肽）底物 | 1nmol | 40uM |
dH2O | Up to 25ul |
总体积25ul，于 30℃孵育 30～40 min 使底物完全生物素化。
5、注意事项
1）本产品的底物为 AviTag 融合蛋白。
2）Buffer A 和 Buffer B 已经针对生物素化反应进行优化，底物浓度不超过 40 µM。如果底物浓度达 40~80 µM，则要加入额外的生物素，反应如下：1 份 10×Buffer A，1 份 10×Buffer B，7 份酶底物混合物和 1 份 D-Biotin。如果底物浓度超过 80 µM，请酌情用 10 mM Tris-HCl, pH 8.0 稀释底物。
3）在相同的酶量下，高浓度的底物（高至 40 µM）可以保证快速完成生物素化，底物浓度越低，生物素化所需时间越长。使 用相同量的生物素连接酶，40 µM 底物可以在 30 分钟内完成生物素化，而 4 µM 底物则需要 5 小时。如果需要在 30 min 内使 4 µM 底物完成生物素化，相同的底物量应加入 10 倍量的酶。
4）如底物蛋白（多肽）需保存在较低温度时，可适当降低反应温度并应延长酶促反应时间。
5）氯化钠（>100 mM）、甘油（>5% W/V）、硫酸铵（>50 mM）等许多常见的缓冲液成分会抑制生物素连接酶的活性。当底物蛋白（多肽）确有必要使用这些试剂时，应尽量降低浓度。
6）底物中可含有 Tris(pH 8.0)， 最佳浓度为 10 mM，不超过 50 mM。
*本试剂仅供实验室研究使用
鄂公网安备：
