关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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Flag标签蛋白纯化试剂盒


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产品品牌: 产品货号:PPR0023K
保存温度:2~8°C 有效日期:0个月
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Flag标签蛋白纯化试剂盒

试剂盒组分

产品编号

预装柱

浓缩基础缓冲液(10×)

浓缩洗脱缓冲液(10×)

浓缩再生缓冲液(10×)

PPR0023K

1ml*2

30ml

15ml

15ml

5ml

30ml*2

30ml

30ml

 

一.产品介绍:

Flag标签是一个由八个亲水氨基酸组成的多肽片段,定位在融合蛋白表面,因此更易与抗体结合以及被肠激酶分解。Flag标签蛋白纯化试剂盒是以抗Flag(DYKDDDDK)抗体为亲和配体,一步纯化原核、酵母或哺乳动物细胞表达的Flag标签融合蛋白。Flag标签蛋白纯化试剂盒里的纯化填料以4%琼脂糖凝胶为基质,杂蛋白非特异性结合少,可用于Flag标签融合蛋白的纯化和免疫沉淀(IP)。

二. 产品使用操作:

1.样品准备

上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用平衡液对样品或细胞培养液稀释,或者用平衡液透析。

样品在上样前建议离心或用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

2.缓冲液的准备

基础缓冲液:按照实验所用量,取试剂盒中浓缩基础缓冲液,加入9倍体积的去离子水稀释成基础缓冲液;

洗脱液:按照实验所需用量,取试剂盒中浓缩洗脱液,加入9倍体积的去离子水稀释成洗脱液;

再生液:按照实验所需用量,取试剂盒中浓缩再生液,加入9倍体积的去离子水稀释成再生液;

缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

3.Frdbio® Flag Beads纯化柱的准备

取出试剂盒中预装柱平衡到室温,打开纯化柱底部开关,用3-5个体积去离子水冲洗柱床,随后用5-10个柱床体积基础缓冲液平衡柱子,确保柱床无气泡。

 

4.从样品中纯化目标蛋白

1)使用蠕动泵上样或者直接上样(重力法);

上样量不要超过柱子的结合能力。

2)上样完毕后,用基础缓冲液洗掉未结合的杂蛋白,直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线(一般需要10-15个柱体积);

3)使用洗脱液洗脱目的蛋白,顺次接收并做好标记,直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线(一般需要5-10个柱体积);

4)SDS-PAGE检测分析得到的纯化样品(包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品。

5.纯化柱清洗、再生与保存。

1)5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液继续清洗;

2)3倍柱床体积的去离子水清洗;

3)5-10倍柱床体积的0.1M NaOH溶液;

4)3倍柱床体积去离子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。

 


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