关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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GV3101感受态细胞


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产品品牌:Frdbio 产品货号:MCC0107
保存温度:-80℃ 有效日期:6个月
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GV3101感受态细胞

产品编号

产品名称

规格

MCC0107

GV3101感受态细胞

100μl*10

保存条件:-80

1.产品简介:

基因型C58 (rif R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR)Nopaline

GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)Ti 质粒含有筛选标签:gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作,AngYuBio GV3101化转感受态经特殊工艺制作,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg

2.使用说明:

1). -80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

2). 100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3). 加入700 μl无抗生素的LBYEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4). 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素(不含四环素抗性)的LBYEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天。(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90h)。

3.注意事项:

1). 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2). 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量,本公司生产的GV3101(pJIC SA_Rep)化学转化感受态细胞具有四环素抗性,但在转入目标质粒涂板筛选阳性克隆时,只需加入目标质粒抗性的抗生素,不加四环素。

3). 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。

4). 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。

5). 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢失的概率极低.

*本试剂仅供实验室研究使用



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