关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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Western及IP细胞裂解液


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产品品牌:Frdbio 产品货号:WBR0105
保存温度:4℃ 有效日期:12个月
英文名称:Cell lysis buffer for Western and IP
规      格: 100ml
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1包装清单:

产品编号

产品名称

规格

WBR0105

WesternIP细胞裂解液

100ml

2保存条件:本产品4保存,一年有效。

3产品简介:

WesternIP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。主要成分为20 mMTris (pH7.5)150 mMNaCl1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphateβ-glycerophosphateEDTANa3VO4leupeptin等多种抑制剂。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGEWestern,免疫沉淀(immunol precipitationIP)和免疫共沉淀(co-IP)。裂解得到的蛋白样品,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(WB0123/ WB0124/ WB0125/ WB0126)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4使用方法:

A对于培养细胞样品:

取适当量的RIPA裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM

B对于贴壁细胞

去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10 min。充分裂解后,10000-14000g离心10 min,取上清。

--裂解液用量说明:用于不同规格标准培养板裂解液容量

板规格/表面积

100 mm

60 mm

6-well plate

24-well plate

96-well plate

 

试剂容量

500-1000 μl

250-500 μl

200-400 μl per   well

100-200 μl per   well

50-100 μl per   well

C对于悬浮细胞:

离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10 min以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g离心10 min,取上清。

 

D对于组织样品:

1)        手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。

2)        取适当量的RIPA裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM

3)        按组织净重(g):裂解液(ml)=110的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)

4)        用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5)        充分裂解后,10000-14000g离心3- 5 min,取上清。

5注意事项:

1)        抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4进行。建议将样品分装成合适的量,然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20中保存,不要反复冻融。

2)        需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mMPMSF(WB0114)可以向我公司订购。

3)        为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

*本试剂仅供实验室研究使用

 


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