SURE感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌SURE 感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，提高外源甲基化DNA的克隆效率，增强外源DNA的稳定性；解决真核生物DNA存在较多“十字型”、 “Z字型”等二级或三级结构导致的克隆问题，可进行蓝白斑筛选。

基因型：E. coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kan^r) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tet^r)]

特点：1．此菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，并且 (McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-)这些限制性突变的存在赋予此菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率。2．同时具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recB recJ)突变，增强了外源DNA的稳定性。3．存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选。具卡那，四环素抗性。pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸ cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．在冰上融化。混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

2．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

*本试剂仅供实验室研究使用