关键词:抗体制备抗体标记重组蛋白表达

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BrdU细胞增殖检测试剂盒


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产品品牌:Frdbio 产品货号:CPK0010-200T
保存温度:2-8°C 有效日期:8个月
英文名称: BrdU Cell Proliferation Assay Kit
规      格: 200T 100T
价      格:优惠价 ¥3580
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货号:CPK0010-200T

BrdU 作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物(其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C 原子连接的甲基被溴代替),像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA 中。当细胞处于DNA 合成期(S 期)而同时又有BrdU 存在时, 就会有BrdU 掺入新合成的DNA 中,只要细胞不消亡,这种BrdU 就在胞核的DNA 中长期存留。

本试剂盒中的小鼠抗BrdU 单克隆抗体可以与掺入进DNA 的结合,再加入HRP 标记的羊抗小鼠,最后通过TMB 底物液显色,其显色值高低与BrdU 掺入细胞量成正比。

试剂盒优点:

与其他细胞增殖检测方法相比较,本试剂盒灵敏度高、没有放射性污染,其可以检测的最低检测限度为50-100 个细胞,并且只检测新增殖细胞。

主要用途:

细胞因子、生长因子、分裂素和营养因子刺激后,监测和定量细胞增殖;

分析药物的细胞毒性个,如抗癌药物等;

分析不同成分对细胞增殖的抑制或者刺激作用

实验样品类型:

贴壁或悬浮细胞

 

试剂盒组分:

组分名称

 规格

数量

存储

细胞培养板

96

2

RT

BrdU 母液(100x)

250ul

1

-20

细胞固定液

25ml

1

-20

细胞变性液

25ml

1

4

BrdU 检测抗体(100x)

250ul

1

-20

HRP 标记羊抗小鼠(100x)

250ul

1

-20

抗体稀释液

30ml

2

4℃/-20℃

洗涤缓冲液(10x)

30ml

2

4

TMB 底物液

12.5ml

2

4

底物终止液

25ml

1

4

产品使用说明书


1

1

试剂盒保存:短期存放可放置2-8℃,长期存放请按说明分别存放。

 

使用之前最好离心,将液体全部归集到管底,然后再开盖;

以下试剂根据所需要的使用量临用前配置,不建议长期储存;

10 x BrdU 溶液:使用前将BrdU 母液(100 x)用细胞培养液1:10 稀释成10 x BrdU 溶液;

BrdU 检测抗体:使用前将BrdU 检测抗体(100 x)用抗体稀释液1:100 稀释成工作液;

HRP 标记羊抗小鼠:使用前按需将HRP 标记羊抗小鼠(100 x)用抗体稀释液1:100 稀释;

洗涤缓冲液:使用前按需将洗涤缓冲液(10 x)用dH2O 110 稀释.

 

试剂盒使用步骤:

1. 细胞培养:

细胞铺板培养,每孔2500-10000 个,在375% CO2 孵箱中培养,根据细胞类型培养相应时间(细胞密度至50-60%左右最好),在合适的时候加入加入待测试的实验组分,培养到合适的时间。

2. 标记BrdU

10 x BrdU5--2-脱氧尿苷)加入培养细胞中,终浓度为1X,培养标记1-48h(根据实验试剂需求来确定最佳标记时间,同时需要设置不加入BrdU作为空白对照)

3. 固定与检测:

1)丢弃细胞培养上清,每孔加入100ul 细胞固定液,室温固定30 分钟(根据细胞特点确定最佳固定时间);

2)吸干孔里溶液,每孔加入100ul 细胞变性液,室温变性5-15分钟(根据细胞特点确定最佳固定时间);

3)吸干孔里溶液,每孔加入300ul 洗涤液,洗三次;

4)吸干孔里溶液,每孔加入100ul BrdU 检测抗体,37℃轻微震荡反应 1小时;

5)吸干孔里溶液,每孔加入300ul 洗涤液,洗三次;

6)加入稀释好的HRP 标记羊抗小鼠,每孔100ul37℃反应 1小时;

7)吸干孔内溶液,每孔加入300ul 洗涤液洗三次;

8)每孔加入100ul TMB 底物液,室温反应5-15 分钟;

9)每孔加入100ul 底物终止液,酶标仪上读取OD450值。

 

注意事项:

1)若是悬浮细胞,必须谨慎操作;细胞固定的时候必须小心吸取细胞上清,必要的时候适当离心;

2)在多次洗涤过程中必须小心,不可将细胞洗掉;

3)固定或变性不彻底都将导致本实验失败;

4加入底物之后显色必须谨慎,不要显色过度以至于背景太高;加入终止液之后需要立即读数。

 

重要声明:

1)  因细胞种类繁多和实验体系不同,细胞脱落不在本试剂盒质量投诉范围中;

2)  数据处理方法不在本产品投诉范围中;

3)  *本试剂仅用于实验室科研使用。


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