1．包装清单：

2．保存条件：Hoechst 33342浓缩液-20°C避光保存；Hoechst 33342稀释液2-8°C保存，一年有效期。

3．产品简介：

Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。常用于细胞凋亡检测和普通的细胞核染色，或常规的DNA染色，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。本Hoechst 33342染色液可用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461n。

4．使用说明：

A．Hoechst 33342染色液的配制：

将Hoechst 33342浓缩液取出解冻，轻轻混匀，短时间离心，根据使用量，按照1 mL33342稀释液加入20 μl33342浓缩液的比例配制，即成Hoechst 33342染色液。此配好的染色液深度为10 μg/mL，如果感觉染色颜色比较深，可适当的稀释（用稀释液）。此配好的染色液未用完可存放于-20°C避光。

B． 对于固定的细胞或组织：

1)    对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

2)    对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5 min。

3)    吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5 min。

4)    直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

C． 对于活细胞或组织：

1)    加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μl染色液。

2)    在适宜于细胞培养的温度培养20-30 min。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

5．注意事项：

1)   Hoechst 33342染色液应稀释至合适的浓度后使用。

2)   荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。

3)   为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4)   避免反复冻融，否则容易失效。

5)   Hoechst 33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护,为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

*本试剂仅供实验室研究使用